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elisa檢測中顯色常見問題的解決
點(diǎn)擊次數(shù):2225 更新時(shí)間:2014-07-24

elisa檢測中顯色常見問題的解決
 


所有檢測孔均無色
原因可能為酶結(jié)合物或底物失效、底物漏加(錯(cuò)加)、陽性對照漏加或錯(cuò)加,其中以酶結(jié)合物失效和底物錯(cuò)加為常見。查找原因的方法是將酶結(jié)合物與底物直接混合,觀察有無顯色;如顯色則提示為陽性對照漏加或底物錯(cuò)加所致;若不顯色,用新酶結(jié)合物與底物混合,觀察有無顯色;不顯色則提示底物失效,顯色提示原用酶結(jié)合物失效。在確定底物錯(cuò)加或失效者,若來加終止液。可重新洗板再顯色。
 
所有檢測孔均顯色
原因多為洗板不凈(扎內(nèi)殘留未結(jié)合的酶結(jié)合物)或顯色時(shí)間過長。洗板是elisa檢測重要環(huán)節(jié).應(yīng)嚴(yán)格按說明書進(jìn)行,可以適當(dāng)延長浸泡時(shí)間、增加洗滌次數(shù)l~2次,否則極易導(dǎo)致假陽性(競爭抑制法為假陰性)結(jié)果。
 
質(zhì)控孔無色
一般為酶結(jié)合物活性降低所致(排除底物錯(cuò)加、失效及漏加質(zhì)控物)。質(zhì)控物一般為臨界值的,是確定試驗(yàn)成功與否的重要依據(jù)。陽性對照雖然顯色,但可以發(fā)現(xiàn)其吸光度變化較大,該批試驗(yàn)須重作,防止弱陽性結(jié)果的漏檢。
 
底物有顏色
目前國產(chǎn)elisa試劑盒的色原底物常為A、B兩種液體,分別為一定濃度的雙氧水和四甲基聯(lián)苯胺(TMB)或鄰苯二胺(OPD)溶液,他們都不穩(wěn)定,使用保存不當(dāng)易產(chǎn)生顏色;在使用時(shí)發(fā)現(xiàn)有顏色(或各取一滴混合后顯色),說明他們變質(zhì)或已受污染,必須丟棄。
 
試劑盒的貯藏應(yīng)按說明書的要求,在elisa檢測中應(yīng)嚴(yán)格按照elisa的操作規(guī)則執(zhí)行,避免elisa檢測中的常見實(shí)驗(yàn)問題。

 

 

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