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提取質(zhì)粒DNA的質(zhì)量和含量的鑒定方法
點(diǎn)擊次數(shù):338 更新時(shí)間:2024-10-11

瓊脂糖凝膠電泳是檢測(cè)DNA質(zhì)量的一種常用方法。? 它利用瓊脂糖溶化再凝固后形成的固體基質(zhì),在電場(chǎng)作用下,帶負(fù)電的DNA分子向陽(yáng)極遷移,不同大小和構(gòu)型的DNA分子遷移速度不同,從而分離出不同的區(qū)帶。這種方法不僅可用于分離不同分子量的DNA,還能分離相對(duì)分子質(zhì)量相同但構(gòu)型不同的DNA分子?。

瓊脂糖凝膠電泳的原理基于DNA分子在電場(chǎng)中的遷移特性。DNA分子在高于等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。遷移速度取決于DNA分子的分子量和構(gòu)型,分子量越大,遷移速度越慢。瓊脂糖凝膠的濃度也會(huì)影響DNA的遷移率,不同濃度的凝膠可以分離不同大小范圍的DNA片段?。


瓊脂糖凝膠電泳鑒定質(zhì)粒DNA

瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng),DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。

由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì),相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速度向正極方向移動(dòng)。
不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DNA片段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠(ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以檢出 10ng的DNA條帶,在電場(chǎng)中,pH8.0條件下,凝膠中帶負(fù)電荷的DNA向陽(yáng)極遷移。

質(zhì)粒DNA提取方法
1,堿裂解法
2,煮沸裂解
3,羥基磷灰石柱層析法
4,質(zhì)粒DNA釋放法
5,酸酚法等。

選擇哪一種方法取決于以下幾個(gè)因素
1,質(zhì)粒的大小
2,大腸桿菌菌株
3,裂解后用于純化的技術(shù)和實(shí)驗(yàn)要求


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