东京热精品乱伦,黄色三级片网站,一本一道AV无码中文字幕,久久亚洲午夜牛牛影视

上海遠慕生物科技有限公司

熒光定量PCR體系各種加樣問題解答
點擊次數:463 更新時間:2024-06-19

PCR反應體系中,各試劑加樣量是如何確定的,DNA模板怎么提取,PCR體系。這個小小管子里都有什么東西、需要加多少呢?今天一起來看一下關于PCR體系的加樣各種問題。

關于體系

PCR技術問世于上世紀80年代。問世之初的PCR體系比較大,動輒以毫升計?,F在的PCR體系要精巧多了,總體積可大可小。我們常接觸到的常規PCR以及熒光定量PCR的體系一般都在幾十微升,小到可以10微升左右。

早期的PCR體系,里面的組分都是各自獨立加樣的,包括DNA模板、上游引物、下游引物、dNTP、Buffer、MgCl2、聚合酶、水。所以早年間做一管PCR需要加樣7——8次才能加完一管。現在就簡化多了。除了特異的 DNA模板與引物以外,其他幾種成分可以做到混在一起,做為PCR Mix統一加樣。這樣每個管一般只需做4次加樣操作即可完成,工作量減少近一半。

DNA模板來源

DNA模板一般來自于從組織中提取的DNA、或者從RNA逆轉錄得到的cDNA。很多經驗表明,逆轉錄得到的cDNA一般要稀釋10倍再做熒光定量PCR,這樣得到的CT值會在一個比較理想的范圍內。當然這并不是固定的做法,還要根據你的實際情況來做調整。用于PCR的引物濃度,比較常用的是10 p mol/ul、等于10 uM。注意單位哦。

PCR mix

PCR Mix由于已經是現成的,所以你不必調節里面的組分。放心,組分肯定是夠用的。因為在一個PCR體系內,引物和dNTP、酶等都是足量甚至過量的。當然PCR Mix并不是簡單的把那幾種成分一古腦混在一起就行的,里面還需要特殊成分以維持其穩定性。對于熒光定量PCR用的Mix,里面還會預混有熒光染料。

dna

如果你對DNA聚合酶有特殊要求,不想簡單的采用PCR Mix,那么你可以單獨選擇你要的那種酶,以及相應的其他組分相配合。

關于體系中的水

水是用于補齊總體積的。PCR由于成分多、各成分又有不同體積,所以加起來的總體積可能并不剛好是理論上的總體積。計算總體積一般要參考其中的Buffer的體積。如果是10 x Buffer,那么總體積就應該是10 x Buffer體積的10倍。如果達不到這么多,就加水補齊。如果PCR Mix以及模板和引物的總體積是剛好的,就可不必加水了。

早年的PCR體系往往還要加另一種成分:液體石蠟油。在PCR總體系配制完成后,最后再在上面加一層液體石蠟油。液體石蠟油比較輕,會漂浮在上面,可防止體系中的水分揮發。這是一種簡單但很實用的做法。現在的PCR管密封很好,又有完善的熱蓋系統,所以這種做法現在已經不太常見了。


上海遠慕生物科技有限公司 版權所有 地址:上海市嘉定區曹安公路5588號 郵編:201202 電話: 管理登陸
傳真:021-58999639 手機:13310162040 聯系人:俞燕熙 郵箱:m13310162040@163.com  GoogleSitemap 網址:m.tzwanheng.com ICP備案號:滬ICP備14029423號-1
主營:ELISA試劑盒/染色液/溶液 /動物血清/標準品/化學試劑
點擊這里給我發消息
手機:13310162040
主站蜘蛛池模板: 制服 丝袜 综合 日韩 欧美| 水久在线免费视频| 日本综合色图| 日韩人妻无码精品久久久久蝴蝶网| 少妇性俱乐部纵欲狂欢少妇| 韩国三级中文字幕hd久久精品| 亚洲成AV人片一区二区| 亚洲av无码精品国产成人| 草操好湿无码| 国产精品视频一区二区三区| 国产一级强片免费视频| 欧美乱妇无乱码大黄a片| 污污污污污污网站| 久久精品国产精油按摩| 中文乱码人妻一区二区三区视频| 都市激情校园春色亚洲乱伦| 久久99精品久久久久婷婷| 色色色女人的天堂| 黄色无毒网站强奸在线播放| 亚洲色偷偷综合亚洲av伊人| 午夜福到在线4国产| 日本三级吃奶头添泬无码苍井空| 萍萍的性荡生活第二部| 高清大学生毛片一| 国产麻豆成人精品av| 少妇无码AV无码专区在线观看| 福利女优在线| 国产av无码专区亚洲av桃花庵| 久久久久av无码免费网站| 岛国av无码不卡| 大屁股熟女一区二区三区| 被特种兵开宫灌满怀孕H| 国产精品特级毛片一区二区三区| 欧美成人A猛片在线观看| 高清无码淫色帝国资源网| 亚洲色电影导航| 久久精品国产亚洲av网站| 亚洲精品v天堂中文字幕| 欧美A区b区| 亚洲成人女优在线| 色色色色色AV色色色AV|