ELISA檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)確操作步驟

面對(duì)市場(chǎng)上種類越來越多的ELISA檢測(cè)試劑盒，人elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒、豬elisa試劑盒、羊elisa試劑盒等，再選擇的時(shí)候我們就有些眼花繚亂了。雖然每個(gè)ELISA試劑盒價(jià)格都不貴，但是如果使用不恰當(dāng)?shù)脑挘斐蓹z測(cè)結(jié)果出差錯(cuò)還是不好的。所以在使用ELISA檢測(cè)試劑盒做檢測(cè)的時(shí)候，步驟的準(zhǔn)確性真的是相當(dāng)重要的。以下先介紹一種簡(jiǎn)單的—間接法：

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

4.（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.zui后一遍用DDW洗滌。

7.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

8.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

9.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

如果按照以上的步驟用于ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的話，那么不論購(gòu)買的國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒還是進(jìn)口ELISA試劑盒的話，那么檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率都不低的。